CRE筛选实验的原理

CRE筛选实验的原理？

答：

     CRE（Cyclic Recombinase Enzyme）筛选实验是一种利用大肠杆菌进行的基因组筛选技术，其原理如下：

1.利用基因重组技术构建目标DNA序列：将需要筛选的目标DNA序列和含有Cre酶可识别位点的载体DNA序列，通过PCR扩增、连接等技术进行基因重组，构建出带有Cre酶可识别位点的目标DNA序列。

2.转化到宿主细胞中：将上述构建好的目标DNA序列转化到大肠杆菌等一定的宿主细胞中，目标DNA序列会被插入到细菌染色体中。

3.Cre酶介导的筛选过程：Cre酶和目标DNA序列的Cre酶可识别位点结合后，引发DNA的重组作用，导致目标DNA序列被剪切并排除在细菌染色体之外。若目标DNA序列含有相应筛选标记（如抗生素抗性基因），则仅含有该标记的细菌可以在培养基上生长，而未被剔除目标DNA序列的细菌无法在该培养基上生长。

4.筛选目标DNA序列：通过培养和筛选，仅含有目标DNA序列、且标记被剔除的细菌得到生长。然后，通过PCR扩增、酶切等技术进行鉴定和验证，最终得到所需的目标DNA序列。

作用原理 一对loxp序列排列差异将导致不同结果,如基因敲除、基因倒位、基因易位等。

a. 敲除:若两个loxP位点位于同一条DNA链上,且方向相同,Cre重组酶可敲除loxP间的序列b. 倒位:若两个loxP位点位于同一条DNA链上,且方向相反,Cre重组酶诱导loxP间的序列倒位

条件性基因敲除的基本原理 Cre

条件性基因 敲除主要是通过Cre／10xP或者Ftp／FRT重组系统来实现的。这两个系统都是位点特异性重组酶系统，已发展成为在体内、外进行遗传操作的有力工具。这两个系统的应用，可以使靶基因的表达或缺失发生在试验动物发育的某一阶段或某一特定的组织器官。此外，若与控制Cre或Flp表达的其他诱导系统相结合，还可以对某一基因同时实现时空两方面的调控。