基质胶上怎样做细胞免疫荧光试验 半贴壁细胞做免疫荧光，该怎么处理呢

基质胶上怎样做细胞免疫荧光试验

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
操作步骤：
1.细胞铺板：将细胞以合适的密度（注意：一般情况下，细胞密度不要太高，不要叠在一起，否则干扰最后拍片）接种于玻底培养皿（b小编用的是confocal皿：如下图）中，进行转染，加药诱导等实验处理。

2.固定：吸去培养基，PBS清洗2次。3min/次。加4%的多聚甲醛(用1X的PBS稀释配制)，室温固定20-30min。PBS清洗3次，3-5min/次。吸干PBS。
3.通透：加0.3%-0.5%Triton X-100(用1X的PBS稀释配制)，室温通透20-30min（如果是检测细胞膜上表达的抗原，则省略此步骤）。PBS清洗3次，3-5min/次。吸干PBS。
4.封闭：在玻底培养皿中滴加正常血清或5%BSA封闭液，室温封闭30-60min；
5.孵育一抗：吸掉封闭液，不用PBS洗，在每个玻底培养皿中滴加足够量的稀释好的一抗，并放入湿盒，4℃孵育过夜；
注意：一般抗体稀释比约为1:50-1:100。正常玻底皿培养皿每皿加50-100ml抗体稀释液（至少要能恰好浸没住底部细胞）。还有必须保证湿盒有水，以免干片。一抗建议回收，放-20℃或-80℃保存。若是检测多个指标，所用一抗必须是不同来源。
6.孵育二抗：回收一抗，加0.1%的PBST 清洗3次，3-5min/次。吸干PBST。滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。
注意：该步骤及之后步骤都需要避光操作。二抗稀释倍数约为1:100-1:200。
7.复染核：滴加DAPI或Hochest孵育5-10min（避光操作），对样品进行染核，PBST 浸洗4次，每次5min。
8.拍片：在共聚焦显微镜或荧光显微镜下观察采集图像。

半贴壁细胞做免疫荧光，该怎么处理呢？

细胞免疫荧光的详细操作步骤 1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。 2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。 3，0.2%Triton X 100通透10分钟，PBS洗三遍。

OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法是什么？

无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。

贴壁细胞的脂质体转染

一、实验材料

1、宿主细胞CHO(贴壁细胞)

2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000(invitrogen公司)

3、6孔细胞培养版

4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)

5、转染级质粒

二、实验步骤

invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧!

1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时，细胞要达到90~95%的融合。

2、溶液1：240ul 无血清培养基 10 ul lipofectamine 2000 per well (总体积250 ul)(温育5min)

3、溶液2：X ul 无血清培养基 4 ug 质粒 per well(总体积250 ul)

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详细资料请参考：on   

http://www.bio1000.com/experiment/cell/237988.html