薄层色谱展开剂的比例如何配 TLC薄层色谱法。急！！！

薄层色谱展开剂的比例如何配

一般体系都是 氨水 甲醇 二氯甲烷，乙酸乙酯，正己烷（或石油醚），如果混合物对酸不稳定就加一点点氨水，对碱不稳定就加一点点醋酸。

主要看极性吧，需要分离的物质极性大，就多用极性大的试一试，极性小就多用极性小的。一般都是从极性小的开始试。首先你得对你的产物极性有个初步的认识，如果实在判断不出来，就从正己烷：乙酸乙酯=50：1开始慢慢调吧。。。

TLC薄层色谱法。急！！！

1.点样板入展开缸但不接触展开剂,使点样板在缸中饱和后进行展开. 这样Rf值相对小,层析效果比较好.
具体操作可以是将层析缸倾斜,放入点样板使其不接触展开剂,加盖并用凡士林防滑密封,15分钟后,轻轻放平层析缸.

2.可以通过调节层析缸倾斜角度来控制 或配展开液后,取适量移入缸内

3.分不开或拖尾可能是没有进行饱和,你可以提前配好展开剂,比如早晨先配好,然后处理样品还有甲醇,乙酸乙酯很容易挥发所以展开剂的比例不可以太小样点不要太大

还有,不是每个分析所用的展开剂都是最合适的再说样品杂志可能很多,对比一下对照品.

如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法

如何建立薄层色谱法测定有关物质的方法
有关物质是研究药品中除主成分以外的杂质，它可能是原料药合成过程中带入的原料、中间体、试剂、降解物、副产物、聚合体、异构体以及不同晶型、旋光异构的物质，也可能是制剂过程中产生的降解物，或是在贮藏、运输、使用过程中产生的降解物等。这些杂质的存在直接反映药品的有效性和安全性，故要对其进行研究，特别是在药品申报的质量研究资料中需建立其检测方法，并根据生产、稳定性考核等实际情况考虑是否在质量标准中制订该检查项，规定其限度。目前，有关物质的常用测定方法有高效液相色谱法(HPLC法)和薄层色谱法(TLC法)。
1．测定方法类型
常用的方法有杂质对照品法（适用于已知杂质）和自身（稀释）对照法（适用于一般杂质检查，杂质成分少且尚不能取得杂质对照品）。目前国内由于难以获得杂质对照品、故一般均采用自身对照法。
2．展开剂的确定（即专属性试验）
专属性的研究是提供被分析物在杂质和辅料存在时能被区分的证明，该点是色谱条件建立的关键。通常采用在被分析物的对照品或精制品中加入一定量的杂质或辅料，证明色谱条件可将各杂质与被分析物分离[1]。这里的关键是：将多少量的杂质加入到多少量的主成分中。正确的作法是将1%(w/w)浓度量的各杂质加入到100%浓度的主成分中，配制这样的溶液来
验证系统适用性。之所以如此配制，目的是模仿样品中有可能存在的状态，即有少量（1%左右）杂质存在时是否能与主成分达到完全分离，只有这样才能比较客观、科学地反映样品中实际存在情况的（见图1）；而不应把该溶液配制成：主成分与中间体相同浓度的。因为一者实际检测时样品中不可能存在此种情况；二者该浓度不易确定，目前国内申报资料中一般的作法均是配制成较低的一致浓度，这样各斑点当然易于完全分离了，但在实际测定时，由于主斑点急剧增大，很易将相邻杂质包含于主成分斑点中。同样，质量标准中的系统适用性试验用溶液的配制方法亦如此。
3．检出条件的确定

其基本出发点是：主成分与相关杂质均应在该条件下显色，且在相同浓度下，斑点大小应基本一致。薄层板的类型根据被测物质的性质来选用，测定有紫外吸收的物质通常选用GF254或GF365板；测定无紫外吸收、需喷显色剂的，常选用硅胶G板或H板，选用该类薄层板时，显色方法根据被测物质的结构式选取，但当有多个显色方法时，应分别进行试验，选取灵敏度最高的显色方法。如醋酸氢化可的松有关物质的测定，中国药典2000年版采用碱性四氮唑蓝试液显色，美国药典26版采用硫酸-乙醇(10:90)溶液显色，两者均为激素类药物的显色方法。醋酸氢化可的松属于激素类中的肾上腺皮质激素，四氮唑法是肾上腺皮质激素的重要显色方法；而硫酸-乙醇显色法则主要是针对激素类中的雌激素的显色反应，对于属于肾上腺皮质激素类的醋酸氢化可的松则反应活性不强，结果两法的灵敏度相差10倍以上。因此，检出条件的确定，一定要在查阅文献的基础上，并根据试验结果进行综合考虑。
4．供试品溶液浓度的确定（灵敏度试验——最低检出限的测定）
供试品溶液浓度的设定在有关物质检测中是至关重要的，浓度越高、越能反映样品中杂质存在的情况，但若设定得过高，则会产生主斑点严重拖尾、“断腰”等超载现象的发生，产生错误结论；若设定太低，又将达不到检测杂质的目的，观测不到杂质量的变化。其设定是根据最低点样量和最大点样量来综合考虑的。

最低检出限虽然是个绝对值，但真正的意义却是其相对值，即相对于供试品溶液的浓度多少而言，所以测定结果不仅要罗列出其绝对值又应列出其相对值，这样最低检出限才有意义！最大点样量则是通过不断加大供试品溶液浓度，直至主斑点严重拖尾、“断腰”等情况出现时来得到的。然后根据最低检出限，采用“上推法”来确定：如一般设定杂质斑点小于1.0%对照斑点，对照溶液的浓度至少应为最低检出浓度（即最低检出限）的20~50倍，则供试品溶液浓度是最低检出浓度的2000~5000倍；反过来，最低检出浓度应至少达到供试品溶液浓度的0.02%~0.05%。应注意的是：由于最低检出量和最大点样量因试验环境、薄层板质量以及即时试验时其他各因素的不同而改变（即耐受性因数），故供试品溶液的浓度在保证小于最大进样量的情况下，可在此基础上设定得再高一些，以保证该浓度可适用于各种条件下。。

薄层色谱法工作原理

薄层色谱法(thin一layer。hrornatography， TLC)一种在薄层板上进行色谱分离和分析物质 组分的色谱分析方法.薄层板上涂有一层固定相，通常 是把一种惫浮在合适溶剂中的吸附剂均匀地涂布于玻 瑞板或金属板上，干燥后即成。最常用的吸附剂为硅 胶、暇化铝和纤维索等.分析时，先将样品溶液点在薄 层板的一端附近(这一过程称为点样)。然后把薄层板 的这一端浸入作为流动相的溶剂系统中，使样品原点 附位于液面上方。流动相通过毛细管作用沿板上升，带 动样品物质向上移动(这一过程称为展开).由于样品 各组分在固定相及流动相中有不同的吸附、溶解等能 力，在展开过程中，经过固定相及流动相对组分的吸 附、解吸等反复作用，使各组分在薄层板上表现出不同 的移动速度从而得到分离. 通过比较分离后的斑点移动的距离可对样品进行 定性分析，常以Rf值作为比较的参数.Rf值定义为斑 点中心移动的距离与溶剂自样品原点至前沿移动的距 离的比值。由于影响Rf值的因素较多，Rf值常随实验 条件的不同而变化。因此需在分析样品的同一块薄层 板上点上标准样品才能进行有效的鉴定. 样品经展开得到分离后，只有有色物质的斑点能 在薄层板上直接观察到，大多数分离后的斑点偏经过 适当的处理后才会显现出来。主要的方法有:①喷以适 当的显色剂，使斑点显色.②紫外灯下观察能发射荧光 的物质斑点。③在涂有荧光指示剂的薄层板上，观察紫 外光照射下斑点处的荧光熄灭.④在无机吸附剂的薄 层板上喷洒硫酸或加热.使有机物质斑点炭化. 薄层色谱法原先主要用于定性分析，随着薄层色 谱扫描仪的出现，使薄层色谱法与其他色谱法一样能 够进行定量分析.这种扫描仪的工作原理是以反射光 法或透射光法对斑点进行扫描，将斑点的颜色(或荧 光)强度转换成峰面积进行定t分析. 薄层色谱法的特点有:①灵敏.可检侧10一‘~l犷， 克物质。②分离迅速。展开所需时间约15~60分钟. ③样品用量少。仅需几个徽升。④设备简单、操作容易。 ⑤可提纯样品，制备标准样品。 薄层色谱法在农业科学、食品工业、医药卫生、环 境保护等领域中有广泛的应用。可用来分离和测定农 药残留量、黄曲排素、氨基酸、磷脂类化合物、生物碱、 花青素、有机酸、街类化合物、植物激素以及徽量金属 离子等。